Для выделения вируса подготовленную сперму инокулируют в культуру монослойных первично-трипсинизированных тканей клеток почек эмбрионов крупного рогатого скота, телят, поросят.

Инфицированную культуру клеток инкубируют при 37°С в течение 6—7 суток. Для контроля оставляют пробирки с незараженной культурой клеток. Размножение вируса учитывают по ЦПД. Специфичность вируса подтверждают биопробой на морских свинках и РН с применением специфической иммунной сыворотки. Отсутствие вируса в материале подтверждают не менее чем в четырех последовательных пассажах.

Мышатам (5—10 при 1—2 кормящих матках) подготовленную сперму вводят под кожу в дозе 0,2 мл. Для контроля одной серии спермы берут не меньше пяти мышат. Парезы, параличи ног и гибель мышат при отсутствии заболевания среди контрольных указывает на возможное наличие в сперме вируса ящура. Морским свинкам суспензию спермы вводят в кожу плантарной поверхности задних ног в дозе 0,2 мл. Если в материале есть вирус ящура, на месте инъекции появляются афты.

Идентификацию типов и вариантов вируса проводят в реакциях связывания комплемента, диффузионной преципитации, серонейтрализации и серозащиты, а также методом перекрестного иммунитета на морских свинках или крупном рогатом скоте.

В РСК тип исследуемого вируса определяют, применяя позитивные гипериммунные сыворотки. В подготовке материала для исследования имеются некоторые особенности по сравнению с описанной выше методикой.

При подготовке антигена материал разбавляют фосфатно-буферным раствором рН 7,6, в который добавляют 20% хлороформа. Суспензию несколько раз замораживают и оттаивают, освобождают от примесей, центрифугируя ее при 3000—4000 обмин в течение 30—60 мин. Иммунную сыворотку и гемолизин применяют в четырехкратном разведении. Сухой комплемент фабричного производства титруют в гемолитической системе и берут для главного опыта 2, 3 и 4%; эритроциты барана — в виде 2%ной взвеси от отмытого осадка. Объем всех компонентов равен 1 мл (по 0,2 мл каждого компонента). Период связывания (первая фаза) при 37° составляет 20 мин, период гемолиза (вторая фаза)—30 мин при той же температуре. Контрольные пробы и учет реакции проводят как в РДСК. РСК ставят по наставлению, утвержденному Главным управлением ветеринарии.