В мазках с культуры стафилококки имеют вид неправильных скоплений, напоминающих гроздья винограда, иногда коротких цепочек, легко красятся обычными красками, грамположительны (в старых культурах некоторые клетки окрашиваются грамотрицательно), жгутиков не имеют, неподвижны. Аэробы или факультативные анаэробы.

При комнатной температуре, рассеянном свете и аэрации стафилококки вырабатывают золотистый, лимонно-желтый, белый и другого цвета пигменты, являющиеся липохромами (не растворяются в воде, растворяются в спирте, эфире, ацетоне). Очень хорошо пигменты образуются при 20—25°С на молочном агаре и картофеле.

Стафилококки вырабатывают протеолитические и сахаролитические ферменты: коагулазу, фибринолизин, мецитиназу, гиалуронидазу, дезоксирибонуклиназу, протеазы и фосфатиды, которые относятся к ферментам с агрессивными свойствами. Патогенные формы продуцируют аргиназу — фермент, расщепляющий аргинин, вырабатывают экзотоксин, проявляющий гемолитическое, некротическое и летальное действие. Выделены также энтеротоксин и лейкоциднн. Ферментируют глюкозу, левулезу, мальтозу, лактозу, сахарозу, маннит, глицерин с образованием кислоты; продуцируют аммиак и сероводород; разжижают желатину; свертывают молоко; восстанавливают нитраты в нитриты; коагулируют плазму крови.