Инокуляцию спермы проводят не менее чем в четырех пробирках. Для этого с монослоя культуры клеток удаляют среду. Клетки промывают питательной средой, после чего в каждую пробирку вносят по 0,1—0,2 мл подготовленной спермы. Выдерживают при комнатной температуре или при 37°С в течение 1—2 ч. Затем сперму удаляют, а культуру промывают 3 раза питательной средой. К культуре клеток добавляют питательную среду (в пробирки по 1 мл, во флаконы — в зависимости от их объема) и инкубируют при 37°С в течение 7— 10 дней. Параллельно ставят такое же количество контрольных пробирок или флаконов с культурой клеток без спермы.

При инкубировании культуры клеток наблюдают за проявлением цитопатического действия. Пробирки с клетками осматривают под микроскопом, начиная со 2го дня после инокуляции. В первом пассаже ЦПД может проявляться с запозданием (через 15 дней), что зависит от малой дозы вируса. Если ЦПД нет и идет нормальный рост клеток, проводят 4—5 слепых пассажей. Для этого культуру инокулированных клеток замораживают при минус 15—40°С и оттаивают. При этом клетки от стенок пробирок отторгаются и частично разрушаются. Суспензию клеток тщательно перемешивают, набирают стеклянной пипеткой и инокулируют на 5— 7дневную культуру клеток в такой же дозе, как и при инокуляции спермы. Если в 4—5 слепых пассажах ЦПД не проявляется, сперму считают свободной от вируса ИРТ — ИПВ. При наличии ЦПД проводят идентификацию вируса.

Вирус, размноженный в клетках культуры ткани, вызывает гибель куриных эмбрионов и белых мышей. Голуби при интрацеребральном заражении не заражаются.

На присутствие хломидий можно исследовать цельную и разбавленную (замороженнооттаянную) сперму. До исследования цельную сперму сохраняют в замороженном состоянии (минус 25°С и ниже). Выделяют вирус инокуляцией исследуемого материала в желточные мешки куриных эмбрионов (КЭ). Чтобы не произошло контаминации исследуемого материала латентными вирусами, мышей и других лабораторных животных использовать в опытах для первичного выделения вируса без инокуляции куриных эмбрионов не рекомендуется.