Определение осмотической резистентности основано на устойчивости спермиев к гипотоническим растворам хлористого натрия. Осмотическую резистентность спермиев определяют в цельной, разбавленной, а также сохраненной при плюсовой температуре и в замороженной сперме для суждения о биологических свойствах спермиев или защитной способности сред. При определении спермиев в неразбавленной сперме соблюдают правила, предупреждающие холодовой шок спермиев. Растворы и лабораторную посуду подогревают до 30—35°С.

Центрифугат сливают в центрифужные пробирки или в чистые флаконы емкостью 10—15 мл, в которые предварительно помещают по 250 мг специально подготовленного активированного угля. Контролем служат 2 пробирки, содержащие по 250 мг угля и по 4 мл 5%ной трихлоруксусной кислоты (вместо центрифугата).

Пробирки с центрифугатом и углем, а также контрольные пробирки ставят в холодильник на 20 мин и перемешивают их содержимое не менее 2 раз. Для лучшего оседания угля к смеси добавляют 0,2—0,3 мл этилового спирта. Затем смесь центрифугируют в течение 10—15 мин при 3—4 тыс. обмин.

Центрифугат сливают, а уголь дважды промывают.. Для этого в пробирку наливают 5 мл дистиллированной воды, 0,2—0,3 мл спирта и центрифугируют в течение 3—6 мин. Затем центрифугат сливают, а осадок вторично промывают дистиллированной водой без добавления спирта (осадок тщательно помешивают стеклянной палочкой).

К промытому осадку добавляют 0,5 мл 2 н. раствора соляной кислоты и 2 мл 1 н. раствора соляной кислоты. Смесь гидролизуют 10 мин в кипящей водяной бане в пробирках, закрытых холодильничками. Пробирки с раствором охлаждают до 18—20°С, добавляют 2 мл дистиллированной воды, перемешивают и центрифугируют 5—7 мин при 3—4 тыс. обмин. Центрифугат отфильтровывают через бумажный фильтр.