Для обнаружения антител берут дозу известного вируса с активностью 1055—1070. Для этого вируссодержаший материал разводят до содержания 100ЦПД500,1 мл, т е вирус разводят до концентрации, превышающей его титр в 100 раз (разводят примерно в 10 или 100 раз). Загрязненный материал (сперму, гемолизированную кровь) центрифугируют при 3000—5000 обмин или фильтруют, инактивируют при 56°С в течение 30 мин и берут разные дозы его. Для этого первоначально делают 4 разведения с коэффициентом 7г раствором Хепкса. К каждому разведению исследуемой сыворотки добавляют равный объем антигена и в зависимости от особенностей вируса смесь выдерживают при 37°С в течение 30 мин или 24 ч при 20°С и заражают культуры клеток или лабораторных животных (например, при ящуре — мышат 7—8дневного возраста).

При использовании РН-клеток применяют 5—7суточную монослойную культуру. На каждое разведение сыворотки берут по 4 пробирки с клеточной культурой. Питательную среду сливают, культуру монослоя промывают и в каждую пробирку вносят по 0,2 мл смеси сыворотка — вирус и 0,8 мл поддерживающей среды. Пробирки инкубируют в течение 5—7 суток при 37°С и ежедневно, начиная со 2го дня инкубации, микроскопируют с целью обнаружения ЦПД. Титр вируснейтрализующих антител определяют по задержке ЦПД вируса и рассчитывают по методу Кербера или Рида и Менча.

Можно определить и индекс вируснейтрализующих антител. В этом случае берут сыворотку в одном разведении (1:5) и десятикратные возрастающие разведения антигена.

При идентификации выделенных вирусов в РН используют стандартные моноспецифические антисыворотки, полученные от гипериммунизированных животных, проведенные в перекрестной РН с эталонными штаммами вируса и инактивированные при 56°С. Реакцию ставят с одним разведением (1: 20) сыворотки с поддерживающей средой и разными разведениями вируса, контролем служит сыворотка, полученная от животных, иммунизированных культурой клеток.