Биохимическая активность у наиболее патогенных стрептококков выражена слабее — не разжижают желатины и казеина, не редуцируют метиленового молока, эскулинотрицательные. Энтерококки редуцируют и свертывают лакмусовое молоко с 0,1% метиленовой сини.

Большинство стрептококков свертывают молоко и плазму крови, растворяют фибрин, восстанавливают нитраты, ферментируют глюкозу, мальтозу, лактозу, раффинозу, сахарозу, маннит (не всегда), расщепляют салицин. Отличительной особенностью для патогенных является то, что они не ферментируют сорбит и глицин. Пиогенные стрептококки группы A отличаются от пиогенной группы С тем, что чувствительны к бацитрацину, не ферментируют лактозу и сорбит, ферментируют трегалозу. Str. agalactiae disagalactiae в среде Эдвардса эскулин не гидролизуют (эскулинотрицательные), а Str. fecalis и Str. uberis — эскулин-положительные — вокруг колоний среда окрашивается в темнокоричневый цвет.

Биохимическую активность определяют посевом микробов на среду Гисса с добавлением к ней 1—2% соответствующего сахара, а также посевом на желатиновую среду, молоко с метиленовой синью и лакмусовое молоко.