Диагностическое исследование включает микроскопию спермы, посевы ее на питательные среды, постановку РМА и биопробу на лабораторных животных с учетом результатов заражения серологическими и бактериологическими методами.

Исследуют свежеполученную цельную и разбавленную сохраненную сперму. Перед исследованием сперму разбавляют 1: 10 средой для выращивания лептоспир, к которой добавляют сульфаниламида 0,3—0,4 г100 мл среды и центрифугируют при 1500—2500 обмин в течение 5—10 мин. Надосадочную жидкость отсасывают пипеткой и переносят в пробирку. Осадок уничтожают.

Микроскопическое исследование спермы. Стерильной пастеровской пипеткой или платиновой петлей наносят на тонкое (1,1 мл толщиной), обезжиренное предметное стекло 1—2 капли центрифугата спермы, покрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом с конденсором «темное поле», осветителем при увеличении об. 40Хок. 10 или 7.

Лептоспиры в темном поле микроскопа видны в виде белых, нежных, волнистых (спиралеобразных), тонких, часто с загнутыми концами (крючки на концах — характерная форма для лептоспир), подвижных нитей длиной 4—18 мкм и шириной 0,07—0,2 мкм. Нити могут иметь также форму С, S, X и цифры 8. Для лептоспир характерно непрерывное, поступательное, вращательное, буравящее, волнообразное или беспорядочное движение. По морфологическим признакам лептоспиры различных серологических групп друг от друга не отличаются.