Бруцеллы хорошо растут на многих питательных средах при рН 6,6—7,4, температуре 34— 38 С. Для первичного выделения и культивирования лучшими средами являются печеночно-сахарно-глицериновый бульон (ПСГБ) и печеночно-сахарно-глицериновый арар (ПСГА). А в зарубежных странах используют Альоими среду.

На скошенном агаре бруцеллы растут в виде блестящих, выпуклых, с гладкой поверхностью колоний с голубоватым оттенком, которые располагаются густо или сплошным налетом. Жидкая питательная среда равномерно мутнеет, а на дне появится небольшой гомогенный и крошковидный осадок.

При появлении роста отбирают наиболее характерные колонии, делают мазки, окрашивают по Граму и Козловскому и пересевают для получения чистой культуры 5формы (типичная форма).

Выделение чистых культур проводят пересевом наиболее типичных колоний на ПСГБ и ПСГА. Для этого платиновой петлей снимают несколько колоний и переносят в пробирку с 1—2 мл ПГСБ и тщательно перемешивают со средой. Затем берут 1—2 капли приготовленной суспензии и пересевают на жидкие и плотные питательные среды.

Для определения чистоты культур колонии окрашивают кристаллвиолетом. Для этого взвесь исследуемой культуры засевают на чашки с ПСГА с таким расчетом, чтобы выросли изолированные колонии. Посев инкубируют 4—5 суток. Для окрашивания колоний в чашку осторожно вносят пипеткой краску в разведении 1: 2000, приготовленную ex temporae путем разведения в 10 раз основного раствора (основной раствор: 0,5 г кристаллвиолета растирают в 10 мл 96° спирта и добавляют 90 мл дистиллированной воды; разведение 1:200).