Определялась также выделяемость на мышах чистых линий вируса (клонов) из отдельных бляшек.
Материал бляшек получали извлечением пастеровской пипеткой агарового столбика с подлежащей бляшкой, эмульгировали в 0,5 мл среды, состоящей из физиологического раствора с 5% нормальной бычьей сыворотки, и им заражали 5—6 мышей интрацеребрально. Мыши заражались через различные промежутки времени после получения материала бляшек (от 30 минут до 3 часов). Наиболее частое заболевание мышей в характерные сроки (5—7 дней) при заражении их материалом бляшек наблюдалось не позднее 30 мин. после извлечения бляшек, в то время как при заражении мышей через 3 часа заболевал лишь небольшой их процент (около 10%). Хранение материала бляшек с момента извлечения бляшки до заражения мышей всегда было одинаковым — или при температуре тающего льда (0° С), или при +4° С в холодильнике.
Описанным методом на мышах было выделено свыше 25 клонов (S-1, Софьин, Кр., Пан, Нург). Титрование клонов Нург интрацеребральным и внутрибрюшинным способами не выявило признаков пониженной нейровирулентности.
С целью замены сыворотки телят в среде покрытия, а также ускорения появления бляшек мы провели ряд опытов:
Замена НТС 10% аминопептида.
Замена НТС 10% альбумина человека (исходный 0,5% раствор).
Инкубация чашек после агарового покрытия при 29° и 40° С.
Покрытие клеток в два этапа: сначала без нейтральрота, а через 3 суток вторичное покрытие средой, содержащей нейтральрот.
Добавление 10% полиглюкина к среде покрытия.
Однако эти опыты не привели к желаемым результатам.
