Вирус, проведенный через цыплят, был подвергнут дальнейшему культивированию в желточной оболочке РКЭ, но уже 9-дневного возраста, с целью закрепления его свойств в стабильных условиях. Всего было проведено 75 пассажей через желточный мешок. На каждый пассаж брали 10 эмбрионов, и каждый раз для последующего пассажа использовался вирус из хорошо промытой оболочки желточного мешка. Этим преследовалась цель отбора вирусных частиц, которые не проникали и не размножались в ЦНС. Периодически, через 5, 10, 15, 20 и более пассажей, производилось титрование вируса на мышах путем интрацеребрального заражения их суспензией вируса из желточного мешка и одновременно, но значительно реже, из суспензии мозга РКЭ. При этом были получены следующие результаты.
Если исходный вирус вызывал заболевание мышей при введении внутрибрюшинно в разведении до 10-2— 10-3, то пассированный вирус в желточных оболочках полностью утратил способность вызывать заболевание при периферическом введении. Однако оказалось, что вирус в оболочке желточного мешка имел слабое накопление, так как во всех случаях титр его на мышах при i/cer введении не превышал 10~3 LD50.
Вместе с тем потолок титра становился стабильным, но с некоторым колебанием активности — до Ю-1 на 75 пассажах.
